Кратко:
Предполагается, что фуллерен C60 как представитель углеродных наносоединений является перспективным средством для применения в фотодинамической терапии благодаря своим уникальным физико-химическим свойствам. Целью данного исследования было оценить накопление фуллерена C60 в лейкозных клетках и изучить его фототоксическое действие на родительские и резистентные к лейкозу цисплатиновые клетки. В экспериментах использовался стабильный гомогенный водно-коллоидный раствор нетронутого С60 со средним диаметром наночастиц 50 нм. Флуоресцентный меченый С60 был синтезирован путем ковалентного конъюгирования С60 с изотиоцианатом родамина В. Результаты конфокальной микроскопии показали, что лейкозные клетки Jurkat могут эффективно поглощать фуллерен C60 из среды. Для возбуждения накопленного C60 использовалась светодиодная лампа (100 мВт / см2, λ = 420–700 нм). Зависимое от времени снижение жизнеспособности было обнаружено, когда лейкозные клетки Jurkat подвергались комбинированной обработке с C60 и видимым светом. Цитотоксический эффект фотовозбужденного C60 был сравним с таковым, вызванным H2O2, поскольку оба агента вызывали 50% -ное снижение жизнеспособности клеток через 24 ч при концентрациях около 50 мкМ. Используя иммуноблот-анализ, оценивали уровни фосфотирозина в клетках.
Совместное действие C60 и видимого света сопровождалось снижением фосфорилирования клеточных белков на остатки тирозина, хотя и менее интенсивным по сравнению с индуцированным H2O2 или ингибитором протеинтирозинкиназы стауроспорином. Все протестированные агенты снижали фосфорилирование белков 55, 70 и 90 кДа, тогда как полное подавление фосфорилирования белка 26 кДа было специфичным только для фотовозбужденного C60.
Цитотоксический эффект C60 в сочетании с облучением видимым светом был продемонстрирован также на лейкозных клетках L1210, как чувствительных, так и устойчивых к цисплатину. Было показано, что относительная величина потенциала митохондриальной мембраны, измеренная с помощью зонда тетраметилродаминэтилэфирперхлората (TMRE), была ниже в резистентных клетках по сравнению с чувствительными клетками, и падение митохондриального потенциала соответствовало дальнейшему снижению жизнеспособности устойчивых клеток после фотовозбуждения C60. Полученные данные позволяют предположить, что C60-опосредованное фотодинамическое лечение является кандидатом для восстановления чувствительности лекарственно-устойчивых лейкозных клеток к индукции митохондриального пути апоптоза.